ABSTRACT
Objective:To study the structure of the human THOC1-THOC2-THOC3 subcomplex by negative-staining electron microscopy. Methods:The recombinant protein components were co-expressed in cultured insect cells, and the protein complex was isolated via sequential Ni-NTA and Strep-Tactin affinity purification followed by Superose gel filtration chromatography. The purified protein sample was then subjected to negative-staining electron microscopy and single particle image analysis. Results:The recombinant human THOC1-THOC2-THOC3 complex with high purity and good homogeneity was obtained by using a tandem affinity purification scheme with Ni-NTA and streptavidin-based chromatography. Preliminary study on the structure of human THOC1-THOC2-THOC3 subcomplex was achieved by electron microscopy using negative staining with uranium formate. Conclusion:A low resolution model of human THOC1-THOC2-THOC3 subcomplex was achieved by single particle reconstruction.
ABSTRACT
In this study thirty shrimp samples from commercial marine shrimp (L. vannamei) farms of southern region of Brazil were obtained. Hepatopancreas and shell scrapings fragments collected in these animals were processed by transmission electron microscopy using negative staining (rapid preparation), immunoelectron microscopy and immunocytochemistry (immunolabelling with colloidal gold particles) techniques. On the transmission electron microscopy a great number of white spot virus particles, ovoid or bacilliform-to-ellipsoid, measured 230-290 nm in length and 80-160 nm in diameter with intra-nuclear projections were visualized by the negative staining technique in 27 (90 percent) out of 30 samples examined. Using immunoelectron microscopy technique, the anti-VP 664 serum agllutinated a large number of particles formed by antigen-antibody interaction. In the immunocytochemistry technique, the antigen-antibody reaction was styrongly marked by the particles of colloidal gold over the virus. Notably, this is the first report, to our knowledge, describing use of these microscopy techniques to study Brazilian L. vannamei marine shrimp samples; moreover, this methodology also appears to be a viable complementary tool for diagnosing the presence of the white spot virus within shrimp tissues. Importantly, these are the first photoelectron micrographs of the WSSV in Brazil.
Se obtuvieron para el estudio 30 muestras de camarones marinos comerciales (L. vannamei) de las granjas de la región sur de Brasil. Fueron procesados fragmentos de hepatopáncreas y raspados internos del cefalotórax recogidos en estos animales por microscopía electrónica de transmisión con tinción negativa (preparación rápida), inmunomicroscopía y técnicas de inmunocitoquímica (inmunomarcación con partículas de oro coloidal). En la microscopía electrónica de transmisión de un gran número de partículas de virus de la mancha blanca, ovoide o elipsoidal a baciliformes, medían 230-290 nm de longitud y 80-160 nm de diámetro. En 27 (90 por ciento) de las 30 muestras examinadas intra-nuclear proyecciones se visualizaron mediante la técnica de tinción negativa. Utilizando una técnica de inmunomicroscopía electrónica, el anti-suero VP 664 reunió a un gran número de partículas formadas por la interacción antígeno-anticuerpo. En la técnica de inmunocitoquímica, la reacción antígeno-anticuerpo fue fuertemente reforzada por las partículas de oro coloidal en los virus. En particular, en Brasil este es el primer informe, a nuestro entender, que describe el uso de estas técnicas de microscopía en muestras de camarón marino L. vanamei. Además, esta metodología también parece ser una herramienta complementaria viable para diagnosticar la presencia del virus de la mancha blanca en tejidos de camarón. Es importante destacar que estas son las primeras fotos en microscopia electrónica del WSSV obtenidas en Brasil.